1、前言
咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物，是一種中樞神經(jīng)興奮劑，能夠暫時(shí)的驅(qū)走睡意并恢復(fù)精力，臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復(fù)蘇。有咖啡因成分的咖啡、茶、軟飲料及能量飲料十分暢銷，因此，咖啡因也是普遍被使用的精神藥品。適度地使用咖啡因具有舒張血管、促進(jìn)血液循環(huán)、預(yù)防高血壓、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、減肥等藥理和生理作用，但是，大劑量或長期使用也會(huì)對(duì)人體造成損害，能夠?qū)е?ldquo;咖啡因中毒”，如神經(jīng)過敏，易怒，焦慮，震顫，肌肉抽搐（反射亢進(jìn)），失眠和心悸。中國把咖啡因列為“精神藥品”管制，屬于一種毒品。目前有關(guān)咖啡因檢測(cè)分析的研究報(bào)道不多，為此本文通過使用SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)對(duì)人體血液中咖啡因進(jìn)行回收率測(cè)定分析，探索血液咖啡因樣本檢測(cè)的方法。
2、實(shí)驗(yàn)過程2.1儀器與試劑
SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，萊伯泰科
MV5多通道平行濃縮系統(tǒng)，萊伯泰科
LC600 二元高壓梯度高效液相色譜，萊伯泰科
EZsepTMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測(cè)科技有限公司 貨號(hào)：PZ12602）
血液替代品：牛血清，市售
咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100μg/mL
咖啡因標(biāo)準(zhǔn)工作液：取1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液放入10mL容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液
2.3實(shí)驗(yàn)部分
取血液樣本1mL加入磷酸鹽緩沖液1mL平衡，加入50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液，混合均勻，加標(biāo)濃度為500ng/mL，待固相萃取。
EZsepTMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測(cè)科技有限公司 貨號(hào)：PZ12702）用5mL甲醇乙酸乙酯（1：1）、5mL水和5mL磷酸鹽緩沖液進(jìn)行活化，取全部樣液上樣，上樣結(jié)束后用2mL磷酸鹽緩沖液和2mL水淋洗萃取柱，在真空狀態(tài)下干燥0.5min，最后用5mL 磷酸鹽緩沖液近干后，用流動(dòng)相定容至1mL 。渦旋混勻，0.22μm濾膜過濾，待檢測(cè)。
色譜柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm
波長：272nm
流速：1mL/min
柱溫：40℃
進(jìn)樣量：20μL
流動(dòng)相：甲醇-水= 24：76
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖
圖2加標(biāo)樣品色譜圖
圖3空白樣品色譜圖表1 加標(biāo)回收率結(jié)果
4、結(jié)論
本次實(shí)驗(yàn)展示了一種使用EZsepTMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測(cè)科技有限公司 貨號(hào)：PZ12702）對(duì)血液中咖啡因進(jìn)行萃取凈化，其加標(biāo)回收率95.8%~99.2%，重復(fù)性RSD為1.6%。說明EZsepTMHLB固相萃取柱適用于血液中咖啡因的檢測(cè)，并且在回收率和平行性上表現(xiàn)優(yōu)異。
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